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豬疫苗
豬胸膜肺炎放線桿菌疫苗開(kāi)發(fā)策略的前沿研究綜述
來(lái)源：羅穎 編譯發(fā)布時(shí)間：2026-04-16 點(diǎn)擊率：2186
摘要：胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，App）感染是一種導(dǎo)致嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的主要呼吸道疾病。該病菌傳染性強(qiáng)且血清型多樣，給防控工作帶來(lái)挑戰(zhàn)。本綜述探討了新一代疫苗的開(kāi)發(fā)策略，以及 App 毒素、莢膜多糖（CPS）、脂多糖（LPS）和外膜蛋白（OMPs）等毒力因子在疫苗設(shè)計(jì)中的作用。傳統(tǒng)疫苗的交叉保護(hù)作用有限，而減毒活疫苗、亞單位疫苗和毒素基疫苗在效力和安全性方面展現(xiàn)出良好的改進(jìn)前景。當(dāng)前及近一代亞單位疫苗和毒素疫苗主要以保守抗原為核心，整合了 App 毒素、外膜蛋白（OMPs）、菌毛黏附素 A（ApfA）和半乳糖 - 1 - 磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶（GALT）等成分，顯著提升了交叉保護(hù)效果和安全性。其他策略包括 DNA 疫苗和聯(lián)合多價(jià)疫苗，這類疫苗針對(duì)高流行 App 血清型，整合了其他病原體的抗原，是一種現(xiàn)代化策略，旨在增強(qiáng)跨血清型保護(hù)、減少副作用，并實(shí)現(xiàn)感染與免疫動(dòng)物鑒別（DIVA）功能。
關(guān)鍵詞：胸膜肺炎放線桿菌；疫苗開(kāi)發(fā)；毒素；毒力因子；免疫保護(hù)
1 引言
胸膜肺炎放線桿菌（App）為革蘭氏陰性兼性厭氧細(xì)菌，分兩個(gè)生物型、19 種血清型，26 個(gè)完整基因組為相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。該菌傳染性強(qiáng)，經(jīng)直接或間接接觸傳播，斷奶期為關(guān)鍵傳播階段，引發(fā)豬呼吸系統(tǒng)疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。疫苗接種是核心防控手段，但現(xiàn)有多數(shù)商業(yè)疫苗為全細(xì)胞滅活菌苗，缺乏跨血清型交叉保護(hù)。本綜述圍繞疫苗開(kāi)發(fā)相關(guān)毒力因子，對(duì)比不同代際疫苗特征，探討多種新一代疫苗開(kāi)發(fā)策略，為疾病防控及疫苗研發(fā)提供參考。
2 毒力因子及其在疫苗成分中的作用
胸膜肺炎放線桿菌的毒力因子在感染中起關(guān)鍵作用，涉及宿主細(xì)胞黏附、營(yíng)養(yǎng)獲取、病損形成及逃避宿主防御等環(huán)節(jié)。相關(guān)因子包括 4 型菌毛、外膜蛋白等，助力細(xì)菌定植、免疫逃避等，還涉及多種攝取通路及應(yīng)激反應(yīng)、外毒素等。（表1）。
表 1 參與宿主細(xì)胞防御和疫苗潛力的多種毒力因子說(shuō)明
細(xì)胞結(jié)構(gòu) | 毒力因子 | 作用 | 疫苗相關(guān)潛力 | 參考 文獻(xiàn) |
菌毛 | ApfA、Ⅳ 型菌毛（Tfp）、TadD | 黏附與定植 | 刺激黏膜和全身免疫 | （9,10） |
外膜 | OmlA、TolC、VacJ、TbpA/B、FhuA | 黏附、營(yíng)養(yǎng)攝取 | TbpA、TbpB 為鐵獲取靶點(diǎn)；TolC 作為分泌和毒力輸出通道，可作為有效亞單位 | （9,10,13） |
表面多糖（CPS/LPS） | CPS、LPS（O 抗原） | 免疫逃避、補(bǔ)體抵抗 | 補(bǔ)體激活和調(diào)理作用的主要靶點(diǎn)，可用于血清分型和感染與免疫動(dòng)物鑒別（DIVA）策略 | （9,15） |
周質(zhì)空間 | 鐵（TbpA（Tbp1 或 TfbA）和 TbpB（Tbp2 或 TfbB）、TonB、ExbBD、FhuA）；鎳、鋅（znuABC）；硫酸鹽（Sbp） | 營(yíng)養(yǎng)獲取與轉(zhuǎn)運(yùn) | 阻斷鐵或鋅攝??；保守且表面可及的免疫靶點(diǎn) | （10,13,15） |
細(xì)胞質(zhì)膜 | 參與分泌的蛋白（如 TolC） | 毒素輸出、鐵攝取 | 毒力輸出 | （10,16） |
細(xì)胞質(zhì) | Apx I-IV、DnaK、SodC、脲酶、relA、LonA、ClpP | 毒素產(chǎn)生、應(yīng)激反應(yīng)、生物膜形成 | 強(qiáng)效類毒素候選物，是亞單位疫苗和類毒素疫苗的核心，刺激 Th1 和 Th2 反應(yīng)，支持免疫激活 | （9,13） |
生物膜基質(zhì) | PGA、ClpP、LonA | 保護(hù)與持續(xù)存活 | 通過(guò)生物膜持續(xù)存在增強(qiáng)長(zhǎng)期免疫 | （9,13） |
宿主相互作用表面 | Adh、AasP、Apa | 宿主組織損傷與黏附 | 作用于補(bǔ)體系統(tǒng) | （9,10,13） |
影響免疫逃避的一般成分 | HlyX、FrpB、PotD、pdxS/T、SapA | 應(yīng)激抵抗、抗菌逃避 | 有助于細(xì)胞內(nèi)存活、免疫逃避和激活 | （9,10） |
胸膜肺炎放線桿菌的核心毒力因子包括 Apx 毒素（ApxI-IV）、LPS、CPS 等。Apx 毒素是疫苗研發(fā)重要靶點(diǎn)，黏附、鐵攝取相關(guān)蛋白及維持細(xì)胞完整性的蛋白均為潛在疫苗靶點(diǎn)。CPS 和 LPS 兼具診斷與免疫原性功能，純化毒素等具有跨血清型交叉反應(yīng)潛力。胞外蛋白 TolC1、外膜囊泡（OMVs）及多種外膜蛋白和脂蛋白，因致病關(guān)鍵作用及保守性，成為疫苗研發(fā)重要候選對(duì)象。
3 疫苗靶點(diǎn)的計(jì)算機(jī)模擬分析
研究人員高度重視計(jì)算機(jī)模擬方法在高經(jīng)濟(jì)影響疾病疫苗和藥物靶點(diǎn)鑒定中的作用，計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)、人工智能等技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)與免疫信息學(xué)方法，可支持靶點(diǎn)篩選、表位預(yù)測(cè)等工作，已應(yīng)用于結(jié)核病、寨卡病毒等研究。在胸膜肺炎放線桿菌研究中，借助相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬從 122 種必需蛋白中篩選出 11 種具抗原性的潛在疫苗靶點(diǎn)，另有分析方法發(fā)現(xiàn) comL 等保守外膜蛋白需聯(lián)合其他成分才能發(fā)揮保護(hù)效力。
4 疫苗類型
4.1 滅活疫苗
第一代商業(yè)化豬胸膜肺炎放線桿菌疫苗為全菌滅活菌苗，由熱殺死或福爾馬林處理細(xì)菌制成，能呈現(xiàn)多種抗原決定簇，且無(wú)減毒活疫苗的毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)，模擬宿主環(huán)境培養(yǎng)可增強(qiáng)其免疫原性。部分近期的滅活疫苗和候選疫苗見(jiàn)表 2。
表 2 滅活疫苗和候選疫苗列表
疫苗抗原成分描述 | 疫苗血清型 | 制備方法 | 給藥途徑 | 動(dòng)物模型 | 結(jié)果 | 參考 文獻(xiàn) |
Aptovac? 滅活疫苗 | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 2、6 和多殺性巴氏桿菌 | 使用氫氧化鋁凝膠佐劑的滅活疫苗 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （37） |
C 疫苗（Coglapix?） | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 1、2 菌株（含 ApxI、ApxII、ApxIII 毒素） | 福爾馬林滅活，鋁凝膠佐劑 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （32） |
Neumosuin? | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 2、4、5 菌株 | 滅活疫苗 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （37） |
Porcilis APP? | 外毒素（ApxI、ApxII、ApxIII）和 42kDa 外膜蛋白（多血清型） | 甲醛滅活，抗原懸浮于水性佐劑中 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （37） |
Serkel PleuroAP? | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 1、2、3、4、5 | 油佐劑或鋁佐劑，福爾馬林保存 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （37） |
Suvaxyn Respifed APP? | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 1、5、7 滅活疫苗 | 福爾馬林滅活，油佐劑 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 商業(yè)化上市 | （37） |
空殼疫苗 | 血清型 9 | 通過(guò)嗜血桿菌 - 大腸桿菌穿梭載體 pAL2 質(zhì)粒表達(dá)克隆的裂解基因 E 制備空殼，在胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基中培養(yǎng) | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 候選疫苗，保護(hù)豬免受定植和感染 | （35） |
AQ6-AP 微球疫苗 | 血清型 1 | 福爾馬林滅活的胸膜肺炎放線桿菌血清型 1（AP-1）抗原 | 口服 | 豬、小鼠 | 豬存活率高，肺部病損面積減少 | （36） |
商業(yè)化 C 疫苗（Coglapix?）含血清型 1、2 全細(xì)胞及 ApxI-III 毒素，對(duì) 8 種血清型具有血清型非依賴性保護(hù)作用，能顯著減少肺部病損。在 NAD 限制條件下培養(yǎng)并經(jīng)紫外線滅活的血清型 10 菌苗，黏附性更強(qiáng)，可提供更好的部分保護(hù)。血清型 9 和 2 的空殼疫苗在限制肺部定植、交叉保護(hù)及抗原識(shí)別方面表現(xiàn)更優(yōu)，且副作用更少，能誘導(dǎo)獨(dú)特抗體滴度。通過(guò)共噴霧干燥工藝制備的 AQ6-AP 口服疫苗，相比肌內(nèi)注射的福爾馬林滅活鋁佐劑疫苗，保護(hù)效果更優(yōu)，可提高豬存活率，減少肺部病損和臨床癥狀。這些研究為滅活疫苗的優(yōu)化與應(yīng)用提供了重要依據(jù)。
4.2 減毒活疫苗
胸膜肺炎放線桿菌減毒活疫苗雖存在毒力返強(qiáng)、減毒不充分等固有風(fēng)險(xiǎn)，但核心優(yōu)勢(shì)在于能模擬自然感染，使存活豬對(duì)同源菌株產(chǎn)生完全保護(hù)，對(duì)異源血清型形成部分交叉保護(hù)。該類疫苗主要通過(guò)敲除關(guān)鍵毒力基因開(kāi)發(fā)，多款突變體候選疫苗展現(xiàn)出良好潛力。部分近期的減毒活疫苗和候選疫苗見(jiàn)表 3。
表 3 減毒疫苗和候選疫苗列表
疫苗抗原成分描述 | 疫苗 血清型 | 制備方法 | 給藥途徑 | 動(dòng)物 模型 | 保護(hù)結(jié)果 | 參考 文獻(xiàn) |
減毒血清型 1A 核黃素突變體疫苗 | 血清型 1 | 在心浸液肉湯（HIB）中培養(yǎng)減毒活疫苗，離心收獲，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌一次 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 保護(hù)豬免受死亡，減少肺部病損和臨床癥狀 | （38） |
胸膜肺炎放線桿菌雙缺失突變體 S-8△clpP/△apxIIC 減毒疫苗 | 血清型 7、1、5b | 利用 apxIIC 基因內(nèi)部片段將 apxIIC 突變引入 S-8△dpP 突變體 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 對(duì)同源或異源血清型感染提供有效保護(hù) | （39） |
胸膜肺炎放線桿菌血清型 1 和 5 的雙突變體△apxIBD△pnp 疫苗 | 血清型 1、5 | 通過(guò)接合轉(zhuǎn)移和蔗糖反向篩選構(gòu)建 apxIBD 基因缺失突變體 | 腹腔注射 | 小鼠 | 僅 APP1△apxIBD△pnp 對(duì)同源攻擊提供 75% 保護(hù) | （40） |
胸膜肺炎放線桿菌血清型 1 的△apxIC/△apxIIC 雙突變體（SLW03） | 血清型 1 | 通過(guò)蔗糖反向篩選法檢測(cè) apxIC 和 apxIIC 基因 | 鼻內(nèi)注射 | 豬 | 對(duì)同源（血清型 1）和異源（血清型 9）攻擊提供完全保護(hù) | （41） |
胸膜肺炎放線桿菌三重缺失突變體△apxIC/△apxIIC/△apxIV-ORF1 減毒活疫苗（SLW05） | 血清型 1 | 通過(guò)一步接合轉(zhuǎn)移程序擴(kuò)增、克隆和切割 orf1 基因 | 氣管內(nèi)注射 | 豬 | ORF1 對(duì) ApxIVA 毒性產(chǎn)生有重要作用，疫苗對(duì)血清型 1 和 3 提供保護(hù) | （42） |
胸膜肺炎放線桿菌血清型 2 的 ureC 和 ApxIIA 基因雙突變體疫苗 | 血清型 2 | 通過(guò)同源重組和反向篩選進(jìn)行缺失突變 | 氣溶膠 | 豬 | 對(duì)同源攻擊提供保護(hù)，有助于血清學(xué)鑒別感染與免疫動(dòng)物（DIVA） | （44） |
胸膜肺炎放線桿菌血清型 2 的六重突變體△apxIIA △ureC △dms △ahyB △asp△afu 疫苗 | 血清型 2 | 通過(guò)將 pFUR702 質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移到五重突變體中構(gòu)建六重突變體菌株 | 氣溶膠 | 豬 | 對(duì)異源感染（血清型 9）的臨床癥狀提供保護(hù)，可血清學(xué)鑒別免疫和感染群體 | （45） |
血清型 1 菌株 SLW01 的 znuA 突變體疫苗 | 血清型 1 | 擴(kuò)增 znuA 基因，通過(guò)一步接合轉(zhuǎn)移將 pEDznuA 質(zhì)粒引入 SLW01 | 氣管內(nèi)注射 | 豬 | 對(duì)同源（血清型 1）和異源（血清型 7）攻擊分別提供 80% 和 100% 保護(hù) | （3） |
血清型 7 的 apxIIC 基因突變體（HB04C） | 血清型 7 | 在胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）中接種無(wú)毒 apxIIC 突變體 HB04C 的活細(xì)胞，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌 | 鼻內(nèi)注射、肌內(nèi)注射 | 豬 | 對(duì)同源（血清型 7）或異源（血清型 1）血清型提供同等保護(hù) | （46） |
血清型 7 的△apxIIC△apxIVA 雙突變體菌株（HB04C） | 血清型 7 | 通過(guò)接合轉(zhuǎn)移和反向篩選在 HB04C 突變體基礎(chǔ)上構(gòu)建 | 氣管內(nèi)注射 | 豬 | ApxIV 是關(guān)鍵毒力因子，可用作鑒別診斷的血清學(xué)標(biāo)志物，單突變體提供良好保護(hù) | （47） |
通過(guò)減毒關(guān)鍵毒力基因開(kāi)發(fā)了減毒活疫苗。核黃素營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變體、S-8△clpP△apxIIC 雙突變體等，可激發(fā)強(qiáng)烈免疫反應(yīng)，對(duì)同源及部分異源血清型攻擊提供高效保護(hù)，能減少肺部病損、降低細(xì)菌載量。APP1△apxIBD△pnp 突變體對(duì)血清型 1 同源攻擊保護(hù)率達(dá) 75%，但對(duì)血清型 5 無(wú)效；SL03 菌株不含外源 DNA，鼻內(nèi)接種可實(shí)現(xiàn)血清型 1 與 9 的跨血清型保護(hù)。SLW05、△znuA 等突變體也均表現(xiàn)出優(yōu)異的跨血清型保護(hù)效果。
針對(duì)血清型 2 開(kāi)發(fā)的脲 C 和 apxIIA 雙突變體、六基因突變體，通過(guò)氣溶膠給藥可保護(hù)豬免受同源或異源血清型攻擊，并能區(qū)分感染與免疫動(dòng)物；血清型 7 的 ApxIIC 突變體、△apxIIC/△apxIVA 雙突變體，對(duì)同源及異源血清型具有顯著保護(hù)效力，且后者可實(shí)現(xiàn)血清學(xué)鑒別，為減毒活疫苗的研發(fā)與應(yīng)用提供了多元方向。
4.3 亞單位疫苗和候選疫苗
胸膜肺炎放線桿菌的莢膜、脂多糖、外膜蛋白等表面成分是重要抗原，轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白、血紅素結(jié)合蛋白等是早期鑒定的潛在疫苗候選物。亞單位疫苗因含 Apx 毒素、外膜蛋白等成分，交叉保護(hù)效果優(yōu)于傳統(tǒng)菌苗，部分已商業(yè)化，如含 ApxIA、ApxIIA 等成分的 Porcilis 疫苗，能降低胸膜炎和肺炎發(fā)病率，減少抗菌藥物使用。部分近期開(kāi)發(fā)的亞單位疫苗和候選疫苗見(jiàn)表 4。
表 4 亞單位疫苗和候選疫苗列表
疫苗抗原成分描述 | 疫苗 血清型 | 制備方法 | 給藥途徑 | 動(dòng)物 模型 | 保護(hù)結(jié)果 | 參考 文獻(xiàn) |
不含 TbpA 的胸膜肺炎放線桿菌（血清型 2、9），無(wú)細(xì)胞上清液（CFS）外膜中檢測(cè)到堿性磷酸酶（Hsp60） | 血清型 2、9 | 在鐵限制條件下培養(yǎng)胸膜肺炎放線桿菌血清型 2 和 9，通過(guò)脫氧膽酸鈉提取制備抗原 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 抗體反應(yīng)強(qiáng)烈，免疫豬無(wú)臨床癥狀或僅出現(xiàn)輕微臨床癥狀 | （51） |
胸膜肺炎放線桿菌體內(nèi)誘導(dǎo)抗原中的重組 GalT 基因 | 血清型 5b | GalT 蛋白加佐劑 | 皮下注射（SC） | 小鼠 | 對(duì)胸膜肺炎放線桿菌血清型 1 MS71（50%）和血清型 5b L20（75%）具有有效的交叉保護(hù)抗原作用 | （52） |
血清型 3 的脂蛋白（APJL_0922、APJL_1380、APJL_1976） | 血清型 3 | 克隆、表達(dá)，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和免疫印跡法測(cè)定脂蛋白在小鼠中的免疫原性潛力 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 潛在亞單位疫苗候選物，對(duì)異源血清型 1 提供保護(hù) | （53） |
血清型 3 的三種蛋白（APJL_0126、HbpA、OmpW） | 血清型 3 | 通過(guò)生物信息學(xué)篩選、基因表達(dá)和純化獲得 | 氣管內(nèi)注射 | 豬 | 抗體滴度高，臨床癥狀輕 | （54） |
胸膜肺炎放線桿菌血清型 5 的細(xì)胞外囊泡（APP-EVs） | 血清型 5 | 通過(guò)離心、切向流過(guò)濾等分步工藝從細(xì)菌培養(yǎng)上清液中提取 | 肌內(nèi)注射（IM） | 小鼠 | 比 Coglapix 疫苗具有更強(qiáng)的細(xì)胞免疫 | （55） |
蛋白（rGalT（胸膜肺炎放線桿菌 2）、rAPL_1166（胸膜肺炎放線桿菌 4）、rHflX（胸膜肺炎放線桿菌 3）抗原） | 血清型 2、3、4 | 生物信息學(xué)篩選、克隆、表達(dá)和純化 | 皮下注射（SC） | 小鼠 | 存活率分別為 62%、5% 和 87.5%，提供部分保護(hù) | （56） |
ApfA（胸膜肺炎放線桿菌 7）+（rApxIA、rApxIIA、rApxIIIA、rApxIVA、rTbpB 蛋白） | 血清型 1、2、3、7 | 純化重組抗原加入油佐劑 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | ApfA 是改善疫苗保護(hù)效果的良好添加成分 | （58） |
感染與免疫動(dòng)物鑒別（DIVA）亞單位疫苗 ApxII 毒素 | 血清型 1、2、5 | 通過(guò)一步接合轉(zhuǎn)移系統(tǒng)制備疫苗抗原；部分血清型經(jīng)去污劑洗滌，加入生理鹽水乳化劑 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 對(duì)同源和異源菌株提供完全保護(hù)，減少定植 | （50） |
多款候選亞單位疫苗表現(xiàn)亮眼：含 ApxII 毒素的感染與免疫動(dòng)物鑒別（DIVA）疫苗，肌內(nèi)免疫后能讓豬免受同源及異源菌株感染，顯著減少定植；rApxI、rApxII 等重組蛋白組合，對(duì)血清型 1、2 的同源和異源攻擊交叉保護(hù)效果顯著；高度保守的 GalT 基因、JL03 菌株的多種脂蛋白及 APJL_0126 等基因，均能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)或提供保護(hù)性免疫，部分需與 Apx 毒素聯(lián)用實(shí)現(xiàn)完全保護(hù)。
此外，細(xì)胞外囊泡（App-EVs）可增強(qiáng)感染保護(hù)反應(yīng)，六種體內(nèi)誘導(dǎo)標(biāo)記蛋白能提供部分保護(hù)。外膜囊泡（OMVs）單獨(dú)使用保護(hù)不足，但 ApfA 與多種重組抗原組合成的六抗原疫苗，免疫原性強(qiáng)烈，為亞單位疫苗研發(fā)提供了重要方向。
4.4 毒素相關(guān)疫苗
Apx 毒素是胸膜肺炎放線桿菌的主要毒力因子，屬于 RTX 毒素家族，具有強(qiáng)免疫原性，分為 ApxI-IV 四種類型，其中 ApxI-III 可分泌至培養(yǎng)上清液，ApxIV 在體內(nèi)表達(dá)，血清型 1 和 5 因產(chǎn)生 ApxI 和 ApxII 毒素毒性最強(qiáng)?；?Apx 毒素的高免疫原性，多款商業(yè)和實(shí)驗(yàn)性毒素基疫苗已被開(kāi)發(fā)。部分近期的類毒素衍生疫苗和候選疫苗見(jiàn)表 5。
表 5 類毒素疫苗和候選疫苗列表
疫苗抗原成分描述 | 疫苗 血清型 | 制備方法 | 給藥途徑 | 動(dòng)物模型 | 保護(hù)結(jié)果 | 參考 文獻(xiàn) |
二價(jià)融合 L 疫苗（ApxIA 和 ApxIIA 片段） | 血清型 1 | 構(gòu)建基因、連接、轉(zhuǎn)化到同一宿主、收獲和純化 | 腹腔注射 | 小鼠 | 誘導(dǎo)特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，對(duì)血清型 2 提供交叉保護(hù) | （61） |
外膜囊泡包裹的三價(jià) Apx 融合蛋白（Apx (I-III) r-OMV） | 血清型 1 | 制備并表達(dá) ApxIAr、ApxIIAr 和 ApxIIIAr 融合蛋白外膜囊泡（OMVs）；使用 ClyA-Apxr 融合蛋白外膜囊泡（OMVs），不含油佐劑 | 皮下注射（SC） | 小鼠 | 誘導(dǎo)特異性體液或細(xì)胞免疫反應(yīng)，對(duì)血清型 1 和 7 等不同血清型提供交叉保護(hù)免疫 | （62） |
表達(dá) Apx 毒素（ApxIIA#5 和 ApxIA）的釀酒酵母疫苗 | 血清型 2 | 在釀酒酵母中表達(dá)表面展示的 ApxIIA#5，表達(dá)完整 ApxIIA 并與酵母融合、克隆 | 口服 | 豬 | 特異性 IgG 和 IgA 水平更高，病損評(píng)分更低 | （65） |
二價(jià) L 疫苗由 ApxIA 和 ApxIIA 蛋白聯(lián)合制成，能引發(fā)強(qiáng)烈體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，提供完全交叉保護(hù)；三價(jià) Apx 融合蛋白包裹在外膜囊泡（Apxr-OMV）中，在小鼠模型中對(duì)血清型 1 和 7 具有交叉保護(hù)作用。商業(yè)疫苗中，含多種血清型全細(xì)胞及 ApxI-III 毒素的 Coglapix?，在降低肺部病損、死亡率等方面優(yōu)于含 Apx 類毒素和外膜蛋白的 Porcilis App?。
此外，利用 N - 糖基化系統(tǒng)開(kāi)發(fā)的糖綴合物疫苗，通過(guò)重組大腸桿菌表達(dá)糖基化 Apx 毒素片段，為表位產(chǎn)生提供新途徑；釀酒酵母表達(dá)的 Apx 毒素口服疫苗，對(duì)血清型 5 攻擊引發(fā)強(qiáng)烈免疫反應(yīng)。ApxIIA 片段 #5 含關(guān)鍵表位，搭配肽配體佐劑鼻內(nèi)免疫，可誘導(dǎo)體液和黏膜免疫反應(yīng)，抑制細(xì)菌定植，對(duì)血清型 2 和異源血清型 5 均有保護(hù)作用，為毒素基疫苗研發(fā)提供了多元方案。
4.5 DNA 疫苗
DNA 疫苗作為第三代疫苗，具有安全性強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好、易于生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)，分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，編碼抗原特異性高，可誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，少量質(zhì)粒 DNA 即可引發(fā)強(qiáng)烈免疫應(yīng)答。
針對(duì)胸膜肺炎放線桿菌的 DNA 疫苗研究取得一定進(jìn)展：源自血清型 1 的二價(jià) DNA 疫苗（含 pcDNA-apxIA、pcDNA-apxIIA），肌內(nèi)給藥后能誘導(dǎo)顯著體液免疫反應(yīng)，激活 Th1 和 Th2 細(xì)胞，對(duì)血清型 1 致死性攻擊具有防護(hù)作用，是潛在創(chuàng)新防控策略。編碼高度保守的 4 型菌毛蛋白（ApfA）的 pcDNA-apfA 疫苗，雖對(duì)血清型 2 攻擊的保護(hù)效力僅 30%，但成功誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，有望作為多價(jià) DNA 疫苗的組成部分應(yīng)用于下一代防控策略。
4.6 聯(lián)合疫苗和候選疫苗
聯(lián)合疫苗通過(guò)組合胸膜肺炎放線桿菌不同成分或整合其他細(xì)菌抗原，可最大化覆蓋胸膜肺炎放線桿菌多血清型，提升保護(hù)效果并優(yōu)化養(yǎng)殖防控效率。部分此類聯(lián)合疫苗和候選疫苗見(jiàn)表 6。
表 6 聯(lián)合疫苗和候選疫苗列表
疫苗抗原成分描述 | 疫苗 血清型 | 制備方法 | 給藥途徑 | 動(dòng)物 模型 | 保護(hù)結(jié)果 | 參考 文獻(xiàn) |
（Bac-Sub）疫苗：血清型 1 的滅活細(xì)菌細(xì)胞和（rApxIA、rApxIIA、rApxIIIA） | 血清型 1、3、7 | 胸膜肺炎放線桿菌 1（HB01 菌株）滅活（5×108 菌落形成單位），與擴(kuò)增、克隆和純化的重組體（rApxIA、rApxIIA、rApxIIIA）各 125μg 混合 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 提供更強(qiáng)保護(hù)，肺部病損更少，細(xì)菌載量更低 | （72） |
胸膜肺炎放線桿菌和豬肺炎支原體多價(jià)疫苗 | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 1、2、5；豬肺炎支原體 HID3140 菌株 | 福爾馬林滅活菌苗加（ApxI、ApxII、ApxIII），從胸膜肺炎放線桿菌血清型 1、2、5 中生產(chǎn)、優(yōu)化和純化；加滅活豬肺炎支原體；純化重組 P97 表面黏附素 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 有望預(yù)防兩種呼吸道疾病，優(yōu)于日生 swine APM 滅活疫苗 | （73） |
胸膜肺炎放線桿菌和豬肺炎支原體多疾病亞單位疫苗（Ap97）（重組嵌合 Ap97） | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 2；豬肺炎支原體 J 菌株 | 混合含有 N 端區(qū)域缺失的 apxIIIA 片段和豬肺炎支原體 P97 黏附素的 R1 和 R2 重復(fù)序列（P97C），形成嵌合蛋白 Ap97，加入弗氏完全佐劑給藥 | 皮下注射（SC） | 豬 | 針對(duì)兩種疾病攻擊的 IgG 和細(xì)胞因子反應(yīng)增強(qiáng) | （74） |
多組分聯(lián)合疫苗（rApxI + rApxII + rApxIII + rApxIVN + rOMP） | 血清型 1、2、7 | 純化蛋白包含等量 rApxI、rApxII、rApxIII、rApxIVN 和 rOMP，1 毫升磷酸鹽緩沖液（PBS）中各 25 微克，與 1 毫升弗氏佐劑混合 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 抗體滴度更高，肺部病損減少，細(xì)菌回收率低 | （75） |
多組分疫苗：滅活胸膜肺炎放線桿菌 1 加（ApxI、ApxII、ApxIV、OMP） | 血清型 1 | 表達(dá)和純化 ApxI、ApxII、ApxIV 和 OMP 基因，然后將 1×109 菌落形成單位滅活胸膜肺炎放線桿菌 1 和每種重組蛋白 150μg，加入油包水乳化劑 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 提供完全保護(hù)，肉眼可見(jiàn)病損減少 67% | （76） |
多組分重組疫苗（rApxI、rApxII、rApxIII、rOMP） | 胸膜肺炎放線桿菌 1、胸膜肺炎放線桿菌 2 | 克隆、表達(dá)和純化 rApxI、rApxII、rApxIII 和 rOMP，用礦物油乳化 | 皮下注射（SC） | 小鼠 | 抗體滴度更高，存活率更高，未觀察到肺部病損 | （48） |
重組串聯(lián)表位（RTA）+ 滅活胸膜肺炎放線桿菌 5b 聯(lián)合疫苗 | 胸膜肺炎放線桿菌 5 | 克隆、轉(zhuǎn)移和表達(dá) rta 基因，純化后加入福爾馬林滅活的胸膜肺炎放線桿菌 5，與鋁凝膠鹽水佐劑混合 | 皮下注射（SC） | 小鼠 | 在小鼠中提供強(qiáng)烈的交叉免疫保護(hù)（100%），臨床癥狀更輕 | （77） |
痤瘡丙酸桿菌的蛋白抗原（PA-Ssb）用于胸膜肺炎放線桿菌疫苗 | 痤瘡丙酸桿菌 S4 菌株（I-B 生物型菌株） | 從分離自人類痤瘡病損的痤瘡丙酸桿菌 S4（I-B 生物型菌株）中提取蛋白基因，克隆、表達(dá)和純化，與弗氏佐劑混合 | 腹腔注射 | 小鼠 | PA-Ssb 誘導(dǎo)針對(duì)胸膜肺炎放線桿菌血清型 1 和 5 的最高抗體滴度和交叉反應(yīng)性（ApxIV 毒素和 Znu） | （78） |
胸膜肺炎放線桿菌三重缺失突變體△apxIC△apxIIC△apxIV-ORF1（SLW05 菌株）抗副豬嗜血桿菌疫苗 | 胸膜肺炎放線桿菌血清型 1 | 胸膜肺炎放線桿菌突變體菌株（△ApxIC、△apxIIC、△apxIV-ORF1）（SLW05）在胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，用磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋作為疫苗 | 肌內(nèi)注射（IM） | 豬 | 誘導(dǎo) Th1、IL-2 和 γ 干擾素，最終保護(hù)豬免受副豬嗜血桿菌 SH0165（血清型 5）或 MD0322（血清型 4）的致死性攻擊 | （79） |
Bac-sub 疫苗由血清型 1 滅活菌與三種重組原毒素組成，搭配 Montanide IMS7 佐劑，無(wú)明顯副作用。其加強(qiáng)免疫后誘導(dǎo)的 Apx 毒素特異性抗體水平高于商業(yè)三價(jià)菌苗和亞單位疫苗，對(duì)血清型 1、5、7 的保護(hù)效力達(dá) 91.76%~100%，能顯著降低肺部細(xì)菌載量和病損。針對(duì)豬胸膜肺炎與支原體肺炎的多價(jià)疫苗，整合兩類病原體的菌苗、毒素及黏附蛋白，優(yōu)于商業(yè)疫苗，可減少注射應(yīng)激；嵌合蛋白疫苗通過(guò)聯(lián)合 ApxIII 毒素與支原體黏附素保守區(qū)域，實(shí)現(xiàn)對(duì)兩種病原體的雙重保護(hù)。
此外，ApxIV 毒素納入多組分疫苗后，能提升對(duì)血清型 1、2 的保護(hù)效果；重組串聯(lián)抗原（RTA）與滅活胸膜肺炎放線桿菌 5b 聯(lián)合，對(duì)異源血清型 1 交叉保護(hù)率達(dá) 100%。痤瘡丙酸桿菌蛋白因免疫交叉反應(yīng)性，對(duì)部分血清型提供部分保護(hù)；減毒胸膜肺炎放線桿菌 SLW05 菌株還能交叉保護(hù)副豬嗜血桿菌感染，為聯(lián)合疫苗研發(fā)提供了多元思路。
5 結(jié)論
胸膜肺炎放線桿菌病是全球養(yǎng)豬業(yè)的嚴(yán)重細(xì)菌性疾病，高傳染性與多血清型特點(diǎn)加大防控難度，疫苗仍是最有效防控手段，但現(xiàn)有疫苗各有局限。第一代全菌滅活疫苗能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，卻交叉保護(hù)弱且可能引發(fā)不良反應(yīng)；減毒活疫苗經(jīng)毒力基因缺失降低致病性，交叉保護(hù)強(qiáng)，但存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)且生產(chǎn)復(fù)雜。第三代疫苗聚焦保守抗原，交叉保護(hù)潛力與安全性顯著提升，部分已展現(xiàn)更優(yōu)保護(hù)效果。聯(lián)合疫苗整合多種成分或多病原體抗原，可防控多種呼吸道疾病，減少免疫次數(shù)，提升養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。
